生物大分子的貯藏保存可分為干態和液態貯藏兩種。所以蛋白保存也有干態保存和液態保存兩種。但是蛋白保存條件卻受諸多因素的影響。下面就為大家分析一下影響蛋白保存條件的因素。
蛋白質失活受多種理化因素的影響,主要有空氣、溫度、水分、光線、酸堿度、樣品狀態、微生物活動、保存時間和容器等;這些因素可單獨起作用,但更多情況是協同作用;以下就對蛋白保存條件受到的影響進行簡要分析
1. 空氣
空氣的影響主要與潮解、微生物污染及自動氧化等有關。空氣中的微生物污染可導致樣品腐敗變質,吸濕后的樣品除潮解變性外也會造成微生物活動的有利環境。某些具有較強還原性的樣品,露置于空氣中不久便氧化變質,如巰基酶的失活等。某些樣品(特別是液體樣品或半成品)在空氣中的氧化是—種自動氧化過程,是由空氣中的氧自發引起的游離基鏈式反應。自動氧化的機理很復雜:包括氧化、還原、聚合、水解等;氧濃度、水、pH、溫度、紫外線等對自動氧化均有影響。
2. 溫度
每種樣品均有其穩定的溫度范圍,溫度升高會引起許多物理和化學變化,如溫度升高l0℃,氧化反應約加快數倍,酶促反應約增加1-3倍;又如50℃以上蛋白質容易變性,不利于物質的穩定存在。另外,適宜的溫度(如室溫)又是微生物污染的重要條件。而低溫卻可以抑制氧化、水解等化學反應及微生物生長,使微生物處于生命遲緩和隱蔽狀態。故大多數生化樣品選擇低溫保存,其穩定性可大大增加。
3.水分
水分也是影響樣品質量的主要因素之一。這里所指的水分,可能來自樣品本身,也可能是樣品吸濕的結果。水分除直接參與水解、酶解、水合和加成等反應外,還能加速氧化、聚合、離解和霉變。蛋白質和酶等大分子含水量太高時,會導致結構松散,穩定性下降而易于失活。為避開或削弱水的影響,保存固態樣品要密閉,液態樣品須凍結或加穩定劑。
4.光線
某些分子可吸收某一波長的光,反射或透過其它光波的光。樣品吸光后,使分子活化,內能增加,不利于樣品保存。在不同條件下,樣品對光的敏感性各不相同,受光作用發生變化的程度也不同。
5.酸堿度
酸堿度對液態樣品的保存影響較大,不同樣品的穩定pH不同,可由實驗求得或從文獻資料查得。液體樣品保存時,常用緩沖劑控制pH,選擇緩沖劑不僅要考慮緩沖容量的大小,還要注意緩沖劑的種類和濃度對樣品穩定性的影響。如青霉素用檸檬酸鹽而不用磷酸鹽和醋酸鹽作緩沖劑,因前者的催化其水解的速度小得多。
6.時間
不同樣品均有其不同的有效期限,因此保存的樣品需要作定期檢查、處理或更換。
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